عفونت توام تريکوموناس فتوس و ژيارديا دئودناليس در دو گربه

عفونت توام  تريکوموناس فتوس و  ژيارديا دئودناليس در دو گربه مبتلا به اسهال مزمن.

Coinfection with Tritrichomonas foetus and Giardia duodenalis in Two Cats with Chronic Diarrhea 

تظاهر بيماري 

دو گربه ماده مين  هم توله شش ماهه توسط يک دامپزشک تحت معاينه قرار داشته اند بطوري که يکي از آنها تاريخچه اي سه ماه از اسهال متعفن آبکي داشته .  تشخيص قبلي بدنبال تجزيه تحليل مدفوعي در هر دو گربه يک عفونت آسکاريسي پايدار را نشان داده و حيوانها توسط درمانگر با ميلبي مايسين اوکسيم  و پرازي کوآنتل (به ترتيب 2 ميلي گرم براي هر کيلوگرم و 5 ميلي گرم براي هر کيلوگرم ، خوراکي  تک دوز )تحت درمان قرار گرفته اند . بدليل تداوم اسهال  در گربه مبتلا تجزيه و تحليل مدفوع به منظور تعيين تاثير گذاري در مان بر عليه آسکاريس و آلودگي با ژيارديا  تکرار شده . نتيجه آزمايش در گربه براي آنتي ژن مدفوعي ژيارديا مثبت بود(IDEXX SNAP_ Giardia Test) و تحت درمان فنبندازول (50 ميلي گرم براي هر کيلوگرم  خوراکي تک دوز ) براي 5 روزقرار گرفت، که تنها بهبودي متوسط و گذرايي در قوام مدفوع حاصل گرديد. چنانکه  چند هفته پس از اين درمان اسهال آبکي تداوم يافت. آزمايش مدفوع ديگري انجام شد که حضور آنتي ژن ژيارديا را آشکار نمود. 

 درمان با  اسپيرامايسين و مترينيدازول (به ترتيب 75000واحد براي هر کيلوگرم  و 12.5 ميلي گرم براي هر کيلو  خوراکي يکبار در روز ) براي 10 روز انجام شد. مدفوع قوام يافته و بدبود نبود، اما چند روز بعد از درمان نشانه ها بازگشتند. در اين مدت گربه ها هنوز از همان بستر استفاده مي نمودند و حتي  مدفوع آن که هميشه شکل مي گرفت  شروع به تظاهر اسهال موي نمود. لذا نمونه هاي مدفوع  اخذ شده از دو حيوان براي آزمايشگاه انگل شناسي  دامپزشکي براي ارزيابي انگلي ارائه گرديد.  تمامي تجزيه تحليل هاي  انگل شناسي براي  هر دو نمونه مدفع در هر دو گربه انجام گرديد.  نخست دو نمونه پس از يخچالي شدن در همان روز ارزيابي شدند، در حالي که نمونه هاي متعاقب بصورت تازه در عرض سي دقيقه پس از تخليه مدفوع مورد ارزيابي قرار گرفتند. با فن آوري غوطه وري گريز از مرکزي توسط محلول نيترات سديم(NaNo3) اسمير هاي تازه مدفوع تهيه و با محلول لوگول رنگ آميزي شدند، و تعين آنتي ژن مدفوعي با استفاده از کيت تجاري در دسترس انجام گرديد.  هيچ نوع کيست تک ياخته اي  يا تروفوزوئيت  و هيچ تخم انگلي با روش گريز از مرکزي  در هر دو گربه معين نشد،در حالي که براي آنتي ژن مدفوعي  ژيارديا  مثبت بود. به هر حال در اسمير مدفوع رنگ آميزي شده با محلول لوگول که از نمونه يخچالي  گربه مبتلا به اسهال آبکي مزمن گرفته شد بود چندين کيست و تروفوزوئيت ژيارديا دئودناليس و عناصر نامعين ديگر پيدا شد. بعداً معلوم شد که اين عناصر نامعين کوچک تر از کيست و تروفوزوئيت ژيارديا دئودناليس  ( با طول ميانگين 8.18 ميکرومتر با حداقل حد اکثر طول  6.98-8.88 ميکرومتر ؛ پهناي ميانگين 6.35 با حداقل –حداکثر اندازه 6.06-6.83 ميکرومتر) قطره اي شکل و به رنگ قهوه اي هستند. يک رنگ آميزي اضافي با گيمسا براي اين اسمير هاي مدفوعي حضور اين عناصر قطره اي شکل نامعين  به همراه کيست ها و تروفوزوئيت هاي ژيارديا دئودناليس را تاييد نمود (تصوير 1)  و معين شد که ديگر عناصر ويژگي هاي ريخت شناسي مشابهي را با تروفوزوئيت هاي تريکوموناس از خود نشان مي دهند(تصوير 2).

تصوير 1: اسمير هاي مدفوع يک گربه مين 6 ماهه مبتلا به اسهال آبکي مزمن  رنگ آميزي شده با محلول لوگول (a-c)  و گيمسا(d-f) . a و d نشانگر تروفوزوئيت ژيارديا دئودوناليس بوده؛ b و e نشانگر کسيت ژيارديا دئودوناليس مي باشند.  C و f تريکوموناد هاي قطره اي شکل را نشان مي دهند. 

تصوير 2:  تريکوموناد ها در اسمير مدفوع  اخذ شده از کربه دچار اسهال . نوک پيکان در  a  نشانگر تاژک قدامي برآمده از تروفوزوئيت  بوده ، در حالي که نوک پيکان در b نشانگر غشاي مواج است.

در رنگ آميزي گيمسا اين عناصر قطره اي شکل نامعين به رنگ آبي روشن تظاهر مي نمودند، آنها سطح نسبتاً صافي داشته و بخشي مواج داشتند ، همچنين داراي يک ساختار خطي منحني دروني به رنگ بنفش -صورتي  بودند ، مشابه با رگبرگ منحني مشهود درکيست کاذب تريکوموناس فتوس گاوي . علاوه بر اين برخي از اين عناصر قطره اي شکل نامعين در اسمير رنگ آميز شده با محلول لوگول يک ساختار بيضي شکل دروني را نشان مي دادند(تصوير 3).

تصوير 3: ريخت شناسي نمونه  از تريکوموناد هاي مشهود درنمونه اسمير تهيه شده از مدفع رقيق شده با محلول نمکي گربه مبتلا به اسهال. نوک پيکان در  a و b به ترتيب  نشانگر تاژک قدامي و غشاي مواج  مي باشد. 

 مطابق با ويژگي هاي ريخت شناسي عناصر انگلي يک  عفونت مشکوک به تريکوموناس فتوس  يا بواسطه پنتاتريکوموناس همونيس مورد فرض واقع گرديد . ارزيابي و تجزيه تحليل دومين نمونه هاي مدفوع رقيق شده توسط محلول نمکي  مدفوع تازه اخذ شده تنها حضور تروفوزوئيت هاي متعلق به تريکوموناس فتوس/ پنتا تريکوموناس هومونيس را که غشايي مواج ، تاژک و حرکت سريع به جلو دارند را تاييد نمود(تصوير 4).

تصوير 4: عناصر نامعين قطره اي شکل در نمونه اسمير مدفوع رنگ آميزي شده با محلول لوگول a و گيمسا b-c . نوک پيکان در a نشانگر ساختار بيضي دروني است. نوک پيکان در b نشانگر ساختار خطي منحني است . نوک پيکان در c نشانگر بخش مواج سطحي است.  

نمونه هاي مدفوع توسط  روش  realtime PCR  با هدف ژن rRNA ريبوزومي 5.8S تريکوموناس فتوس مورد پردازش و  ارزيابي ملکولي قرار گرفتند. ارزيابي ملکولي اسيد نوکلوئيک استخراج شده از نمونه هاي مدفوع  هر دو گربه حضور ريزجاندار تريکوموناس فتوس را تاييد نمود. تشخيص نهايي آلودگي توماً با ترکوموناس فتوس و ژيارديا دئودوناليس در هر دو گربه بود. متعاقب اين نتايج نهايي آزمايشگاه انگل شناسي و تشخيص اوليه آلودگي با تريکوموناس فتوس هر دو حيوان تحت درمان با رونيدازول قرار گرفتند( 30ميلي گرم براي هر کيلو خوراکي يک بار در روز ) براي 14 روز. پيش از  تعليق درمان ارزيابي هاي انگل شناسي و آزمون PCR انجام  و نمونه هاي مدفوع منفي بودند.  شش هفته پس از درمان صاحب دام گزارش نمود که گربه مدفوع عادي داشته و نتايج  آزمايشگاه انگل شناسي براي مدفع گربه ها منفي است.